使用水質(zhì)微生物檢測儀進行水樣檢測，需嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化流程，確保操作的規(guī)范性與檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。以下將從檢測前準(zhǔn)備、樣本處理、培養(yǎng)觀察到結(jié)果計算的全流程進行詳細(xì)拆解，并補充關(guān)鍵細(xì)節(jié)與注意事項。
一、檢測前準(zhǔn)備：確保物料與設(shè)備就緒
物料準(zhǔn)備
水樣采集：使用無菌采樣瓶收集水樣，確保采樣過程避免污染。對于不同類型水樣，如飲用水應(yīng)采集龍頭水或管網(wǎng)末梢水；廢水需在排放口多點位采樣混合。采樣后盡快送檢，若無法及時檢測，需將水樣保存在 2-8℃環(huán)境中，且保存時間不超過 6 小時。
定量檢測盤選擇：根據(jù)水樣預(yù)期微生物濃度選擇合適規(guī)格，若預(yù)估濃度較低(如飲用水、經(jīng)過處理的中水)，選用 51 孔定量檢測盤(檢測范圍 0 - 200MPN/100ml)；若濃度較高(如未經(jīng)處理的廢水、受污染水源水)，則采用 97 孔定量檢測盤(檢測范圍 0 - 2419.6MPN/100ml)。
試劑準(zhǔn)備：取出酶底物法檢測試劑(Minimal Medium ONPG - MUG 培養(yǎng)基)，檢查試劑外觀是否澄清、有無沉淀或變色，確認(rèn)在有效期內(nèi)(通常為 2 年)。試劑使用前需恢復(fù)至室溫(約 20 - 25℃)，避免因溫度差異影響反應(yīng)。
定量瓶與耗材：準(zhǔn)備潔凈的 100mL 定量瓶，確保無殘留清潔劑或雜質(zhì)；同時備好移液器、滴管等輔助工具，并進行滅菌處理(如濕熱滅菌 121℃，15 分鐘)。
設(shè)備調(diào)試
開啟程控定量封口機，進行預(yù)熱(預(yù)熱時間≤3 分鐘)，檢查設(shè)備顯示屏是否正常顯示，設(shè)置封口溫度(通常默認(rèn)參數(shù)即可，如需調(diào)整需參考說明書)，測試封口功能是否正常，確保無漏封、破孔現(xiàn)象。
準(zhǔn)備恒溫培養(yǎng)箱，將溫度調(diào)節(jié)至對應(yīng)檢測需求：檢測總大腸菌群和大腸埃希氏菌時設(shè)置為 36℃±1℃；檢測耐熱大腸菌群時設(shè)置為 44.5℃，提前 30 分鐘開啟培養(yǎng)箱，使溫度達到穩(wěn)定狀態(tài)。
二、樣本處理：規(guī)范操作避免誤差
水樣與試劑混合：準(zhǔn)確量取 100mL 水樣倒入定量瓶中(若水樣渾濁或雜質(zhì)較多，需先通過濾紙過濾，但需注意過濾可能影響微生物數(shù)量，必要時采用離心處理)，再緩慢加入等量的酶底物法檢測試劑，使用振蕩器或手動上下顛倒定量瓶 10 - 15 次，使水樣與試劑充分混勻。
分裝至定量檢測盤：使用移液器或滴管，將混合液均勻分配至定量檢測盤的各孔位中，確保每個孔加入的液體量一致(約 1mL / 孔)，避免液體溢出或孔位殘留氣泡。若孔內(nèi)存在氣泡，可輕拍定量盤側(cè)面使氣泡排出，否則可能影響反應(yīng)和結(jié)果觀察。
定量盤封口：將裝滿樣本的定量檢測盤平穩(wěn)放入程控定量封口機的工作區(qū)域，啟動封口程序。封口機將在 10 - 12 秒內(nèi)完成密封，取出定量盤時注意避免擠壓或碰撞，防止密封膜破損導(dǎo)致樣本泄漏或污染。
三、恒溫培養(yǎng)與結(jié)果觀察：精準(zhǔn)把控關(guān)鍵環(huán)節(jié)
恒溫培養(yǎng)：將封口后的定量檢測盤放入預(yù)熱好的恒溫培養(yǎng)箱中，根據(jù)檢測目標(biāo)設(shè)定培養(yǎng)時間為 24 小時。培養(yǎng)過程中避免頻繁開啟培養(yǎng)箱，防止溫度波動影響微生物生長。若同時培養(yǎng)多個定量盤，需確保盤與盤之間保持適當(dāng)間距，保證空氣流通。
結(jié)果觀察：培養(yǎng)結(jié)束后，取出定量檢測盤，在自然光或白色背景下觀察孔位顏色變化，對于疑似大腸埃希氏菌的檢測，需使用 366nm 紫外燈照射檢測盤，觀察是否產(chǎn)生藍色熒光。記錄下呈現(xiàn)黃色的孔位(代表總大腸菌群或耐熱大腸菌群陽性)和產(chǎn)生熒光的孔位(代表大腸埃希氏菌陽性)數(shù)量。若孔位顏色變化不明顯，可將檢測盤靜置 15 - 30 分鐘后再次觀察，或與標(biāo)準(zhǔn)比色卡對比確認(rèn)。
四、結(jié)果計算：依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)得出準(zhǔn)確數(shù)據(jù)
根據(jù)定量檢測盤的陽性孔分布情況，查閱對應(yīng)的最大可能數(shù)(MPN)表(51 孔盤和 97 孔盤對應(yīng)不同 MPN 表)。例如，若使用 97 孔定量檢測盤，檢測后發(fā)現(xiàn)有 20 個陽性孔，通過查閱 MPN 表，可得出該水樣中微生物濃度為 180MPN/100mL 。若檢測結(jié)果超出定量盤的檢測范圍，需對水樣進行稀釋(如 10 倍、100 倍稀釋)后重新檢測，并根據(jù)稀釋倍數(shù)修正最終結(jié)果(計算公式：實際濃度 = 查表 MPN 值 × 稀釋倍數(shù))。
在整個檢測過程中，需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，避免交叉污染；每次檢測建議設(shè)置空白對照(使用無菌水替代水樣進行同樣操作)，以驗證檢測過程的準(zhǔn)確性。若出現(xiàn)異常結(jié)果(如空白對照孔位顯色、檢測結(jié)果與預(yù)期差異較大)，需檢查試劑有效性、操作步驟是否規(guī)范，必要時重新檢測，確保出具的數(shù)據(jù)真實可靠。
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